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正文:

共軛焦顯微鏡 (Confocal microscopy) 影像分析

功能及原理:
幾何光學(xué)上，光源的焦點(diǎn)、顯微鏡物鏡的焦點(diǎn)（光在樣品內(nèi)部的焦點(diǎn)）和針孔
（pinhole）及偵測器（如:光電倍增管）的焦點(diǎn)位置互相對稱（落在同一焦點(diǎn)上）稱之為
：共軛焦。只有對焦的（焦點(diǎn)在針孔位置）的光線才能通過針孔返達(dá)偵測器，不對焦的光
線以及樣品探測點(diǎn)外散射光的干擾都被被屏蔽掉，而形成單一偵測點(diǎn)的完美影像。樣品在
聚焦平面的二維影像（X-Y）可經(jīng)由對樣品進(jìn)行水平平移掃瞄得以重現(xiàn)。光學(xué)切片術(shù)之三
維影像，則是加上在垂直方向（Z-方向）的細(xì)微掃瞄，所得之訊號再經(jīng)電腦分析處理與影
像重組呈現(xiàn)。共焦掃描顯微鏡極大之優(yōu)點(diǎn)就在：其光學(xué)斷層掃描不需將樣品實(shí)際切片，就
可利用清楚顯示樣品內(nèi)部（厚度可達(dá)10 µm）。

應(yīng)用范例:
◎斑馬魚之3-D血管螢光造影
◎胞器螢光影像3-D造影

樣品前處理:
若為細(xì)胞，事先將其培養(yǎng)在chamber slide或直徑24 mm的蓋玻片（coverslip，底部厚度
皆為0.17 mm）上，必要時(shí)應(yīng)事先在其上poly-L-lysine涂膜在蓋玻片上，以增加細(xì)胞之黏著
性，然后進(jìn)行螢光染色：如免疫螢光、活體螢光染劑或是轉(zhuǎn)染后表現(xiàn)之GFP融合蛋白。但
若為后組織切片或動物體，如斑馬魚等，則只能使用10到20倍物鏡觀察，且物體的移動可
能影響3-D造影。

◎單一活細(xì)胞之綠螢光融合蛋白影像3-D與追蹤
◎不同蛋白分子相對位置之確認(rèn)（colocalization）