標題：顯微鏡下在單細胞個體水平上測定細菌分析顯微鏡
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2017-8-16 20:04:19
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正文:
顯微鏡下在單細胞個體水平上測定細菌分析顯微鏡
GFP作為細菌基因表達的報道基因
熒光標記與報道基因技術的結合使用被證明是植物上細菌行為
的一種有力的研究工具。熒光報道基因和目的細菌基因的融合使得
我們能夠在顯微鏡下在單細胞個體水平上測定細菌基因的轉錄活性
，而不是在群體水平上。因此，在特定環(huán)境下我們就能夠測定基因
的轉錄活性的分布，由此可進一步了解基因潛在表型所發(fā)揮的作用
。
除非實驗研究是在無菌條件下開展，否則還需要一個額外的標
記基因來將研究細菌對象與植物本身的內(nèi)生細菌區(qū)分開來。額外標
記的使用將確保由于所包含的目的基因轉錄活性低甚至沒有從而導
致報道基因信號很低的細菌能夠被檢測出來。在首次該類研究中，
Brandl等人將功基因與E. herbicola的生長素( IAA)合成基因融合
在一起，用熒光原位雜交(FISH)技術研究IAA合成在這種豆葉細菌E
. herbicola種類中的分布。將含有功融合基因的轉化FL herbicol
a菌株接種在植物上，培養(yǎng)以使細菌生長定植。然后，從葉片表面
將細菌細胞漂洗下來，在顯微鏡玻片上用對E. herbicola特異性的
四甲基羅丹明標記的16S rRNA探針進行熒光原位雜交。對獲得的熒
光顯微圖像進行數(shù)字分析來測定經(jīng)FISH染成紅色的細菌細胞所發(fā)出
的綠色熒光強度。單細胞GFP熒光強度的分布頻率表明，在葉面上
僅有很小比例的E. herbicola細胞高水平地表達了IAA基因，表明
葉片表面存在某些微生境有助于IAA的大量產(chǎn)生。隨后采用同樣方
法的研究表明，E. herbicola可利用的蔗糖和果糖，Pseudomonas
syringae(13]可利用的鐵離子在植物表面的分布是不均勻的。在上
面的所有研究中，熒光原位雜交能夠對同一種細菌在菌株水平上進
行特異性的標記。此外，利用羅丹明來標記16S rRNA探針所發(fā)出的
熒光發(fā)射光譜信號與GFP熒光信號有明顯的區(qū)別，從而可避免對顯
微鏡濾光下熒光信號的錯誤判斷。光學串擾是在多標記熒光實驗的
一個主要問題。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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