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正文:
冷凍細(xì)胞液細(xì)胞培養(yǎng)分析圖像
顯微鏡制造
細(xì)胞的冷凍與定量復(fù)蘇
—般認(rèn)為,細(xì)胞在冷凍復(fù)蘇過程中,胞內(nèi)所形成的冰晶以及滲
透壓的變化是細(xì)胞受損的主要原因。若在冷凍細(xì)胞液中加入保護(hù)劑
如二甲基亞砜(DMSO)或甘油,選擇合適的冷凍及凍融速度則可減少
細(xì)咆的損害。
細(xì)胞系的短期保存可用冰箱(一75℃),若將細(xì)胞放入液態(tài)氮(
一196℃)或是其蒸氣(一135℃)保存則更好。液氮冰箱保存細(xì)胞有
許多優(yōu)點(diǎn),不僅保存溫度較低,而且可較長時間保存,幾乎沒有機(jī)
械性損傷的危險。因此要保存較小細(xì)胞庫的活性,將其細(xì)胞存入液
氮冰箱是很必要的。
在冷凍保存細(xì)胞系的過程中,應(yīng)特別注意安全問題:
(1)由于液氮可通過盛細(xì)胞的安瓿上的細(xì)小縫隙進(jìn)入瓶內(nèi),當(dāng)
加溫時,液氮在有限的空間內(nèi)迅速膨脹造成爆炸,對操作者有很大
的危險。但工作人員只要很好地掌握細(xì)胞培養(yǎng)瓶的密封并仔細(xì)檢查
,就可減少這類意外損傷的發(fā)生頻率。然而,即使是熟練的實(shí)驗(yàn)室
工作人員,也可能遇到一些間接原因引起的爆炸。因此,從液氮罐
中取出細(xì)胞時,操作者應(yīng)戴防護(hù)面罩,直到細(xì)胞瓶安全地放入無菌
操作臺中。
(2)DMSO能溶解有機(jī)物質(zhì),它可以滲入橡皮手套,透過皮膚將D
MSO滲入血液循環(huán),因此,使用DMSO時要特別小心,避免有害化學(xué)
物質(zhì)的污染,減少與皮膚的接觸機(jī)會。
(3)當(dāng)放入或取出冷凍細(xì)胞,或是給液氮罐蓋蓋子時,液氮都
會蒸發(fā)出來,因此放置液氮罐的房間要有較好的通風(fēng)設(shè)備。
(4)由于冷凍物的溫度極低,有造成永久性凍傷的危險,因此
操作者要注意載手套,面罩,穿工作服。
(5)玻璃安瓿不能用于保存取自于病毒感染患者的細(xì)胞系
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