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標(biāo)題:克服高解析度顯微鏡遭遇到失焦的障礙!!

信息分類(lèi):站內(nèi)新聞   作者:yiyi發(fā)布   時(shí)間:2011-11-14 1:00:09 將本頁(yè)加入收藏

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正文:

但超高解析度顯微鏡究竟是不是也會(huì)遭遇到失焦的障礙?衍射現(xiàn)像的發(fā)生是當(dāng)我們?cè)谧鲲@微觀(guān)察時(shí),通常將焦點(diǎn)放在單一點(diǎn)(或分子)上,這個(gè)焦點(diǎn)的位置是定位在觀(guān)察物反射光的中心位置;但當(dāng)我們要觀(guān)察的目標(biāo)出現(xiàn)多個(gè)反射光點(diǎn)時(shí),此時(shí)兩個(gè)以上的光點(diǎn)將會(huì)出現(xiàn)重疊現(xiàn)象使得我們無(wú)法找到觀(guān)察目標(biāo)的真正位置。也就是研究員要有辦法隨時(shí)開(kāi)關(guān)各個(gè)觀(guān)察分子的亮光。要達(dá)到這項(xiàng)目標(biāo),研究員則須利用基因改造方式將觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)引入螢光蛋白體,而兩條雷射射線(xiàn)原則上可以只讓某幾個(gè)研究員想要觀(guān)察的分子同時(shí)發(fā)亮,也因此,這些螢光細(xì)胞便成為顯微鏡下的觀(guān)察影像焦點(diǎn),當(dāng)研究員以這個(gè)方式觀(guān)察一部分的細(xì)胞表面組織后,他們將必須反覆重複同樣的步驟,直到全部觀(guān)察完所有的表面組織為止。反之,如果細(xì)胞沒(méi)有經(jīng)過(guò)螢光基因改造的話(huà),科學(xué)家將無(wú)法研究細(xì)胞表面的分子結(jié)構(gòu),也不能在須臾間掌握分子的運(yùn)動(dòng)軌跡,而且經(jīng)過(guò)基因改造后的螢光分子僅能維持不到一秒的發(fā)光時(shí)間。

現(xiàn)在,分子無(wú)線(xiàn)光學(xué)研究中心與神經(jīng)突觸細(xì)胞生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物學(xué)家(隸屬于國(guó)家科學(xué)研究院與波爾多大學(xué)的研究室)發(fā)明了一種新的技術(shù)來(lái)讓細(xì)胞分子「發(fā)亮」,這個(gè)原理便是使用即時(shí)免疫性染劑(immuno-marquage en temps reel),受測(cè)的活體細(xì)胞被放在一種具有螢光抗體的溶液中(這種溶液有在市面上販?zhǔn),所用的抗體要依觀(guān)察目標(biāo)而作改變),使得螢光抗體融入細(xì)胞中,不過(guò)研究員不需要讓所有細(xì)胞都染上這樣的抗體,而是將螢光染劑注入到顯微鏡中,在觀(guān)察的過(guò)程中,一部分的抗體會(huì)自動(dòng)與欲觀(guān)察的分子進(jìn)行聯(lián)結(jié)進(jìn)而使其發(fā)光,隨后,當(dāng)這部分的螢光消失后,其他部分的分子則會(huì)在逐步的觀(guān)察中自動(dòng)地接受到顯微鏡內(nèi)存的螢光染劑而逐一發(fā)光。

這項(xiàng)技術(shù)得以讓研究人員紀(jì)錄數(shù)以千計(jì)的單一細(xì)胞分子之運(yùn)動(dòng)軌跡,并且可以奈米層級(jí)觀(guān)察這樣的動(dòng)態(tài)現(xiàn)象,國(guó)家科學(xué)研究中心與波爾多大學(xué)的研究員也向世人展示了這項(xiàng)技術(shù)具有高度效率以及可在各種不同的細(xì)胞系統(tǒng)(異質(zhì)細(xì)胞、突狀纖維細(xì)胞或我們一般所說(shuō)的神經(jīng)細(xì)胞)內(nèi)觀(guān)察內(nèi)膜組織中的各種分子。這項(xiàng)技術(shù)不僅使用簡(jiǎn)單、用途廣、并且十分可靠,從今以后一般大眾就算沒(méi)有傳統(tǒng)的光學(xué)顯微設(shè)備也可以進(jìn)行細(xì)部的細(xì)胞分子觀(guān)察。更特別的是,我們甚至也可以以每秒50奈米的解析度拍攝諸如神經(jīng)元等單一細(xì)胞的活動(dòng)變化(相當(dāng)于一般攝影中每秒20個(gè)畫(huà)面)。波爾多大學(xué)的研究學(xué)者已經(jīng)開(kāi)始以此觀(guān)察活體神經(jīng)突觸內(nèi)神經(jīng)接受器的動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)。相信有其他許多研究團(tuán)隊(duì)也會(huì)陸陸續(xù)續(xù)採(cǎi)用這項(xiàng)技術(shù),屆時(shí)可以預(yù)期生物界將會(huì)颳起一陣研究觀(guān)察的革命。











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