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正文:

組織學(xué)之染劑染色法教程-生物顯微鏡專(zhuān)業(yè)供應(yīng)！

 
1.基本步驟：

(1)   fixation：利用共價(jià)鍵的生成，讓物質(zhì)的相對(duì)位置固定

LM：fomalin的醛基能與一級(jí)胺作用

EM：osmium tetraxide：能與雙鍵CC產(chǎn)生cross link

(2)   dehydration：利用alcohol

(3)   embedding：利用parrafin(石蠟)或是plastic resin(樹(shù)脂)包埋

(4)   sectioning：利用microtome做切割

(5)   mounting：光學(xué)用顯微鏡載玻片，電顯用copper grid

(6)   staining：光學(xué)用染劑法；電顯用鉛、鈾等原子序大的金屬，因放出的電子較多能夠增加對(duì)比度

2.      染色：

(1) dye染劑染色法

→hematoxylin與eosin：H E染色法

(a)    hematoxylin帶正電，染負(fù)電物質(zhì)(ex.核酸)，藍(lán)色

(b)   eosin帶負(fù)電，染正電物質(zhì)(ex. 蛋白質(zhì)中的Arg , Lys)

→acidic dye：帶負(fù)電荷，染basic substance

Basic dye：帶正電荷，染acidic substance

(2) enzyme histochemistry

→利用酵素作用mechanism，給予適當(dāng)?shù)膕ubstance以偵測(cè)該酵素的位置

(3) immunocytochemistry

→設(shè)計(jì)抗體辨識(shí)特定的物質(zhì)，在利用螢光呈色，標(biāo)示該物質(zhì)的位置

→依照螢光物質(zhì)接的位置分成direct與indirect兩種

a. direct：primary antibody上有螢光物質(zhì)，直接辨識(shí)target

b. indirect：primary antibody辨識(shí)target，再加入帶有螢光物質(zhì)的’secondary antibody辨識(shí)primary antibody

(4) FISH(fluorescent in situ hybridization)

→加入一段帶有螢光的DNA probe(探針)，會(huì)與其互補(bǔ)的DNA，mRNA片段hybridize

→藉此可以偵測(cè)特定gene，mRNA的位置(ex,唐氏癥的檢測(cè))

(5) autoradiograph

→利用放射性標(biāo)定，觀(guān)察生化路徑或是標(biāo)定酵素位置

→加入標(biāo)定的amino acid，即可觀(guān)察細(xì)胞中合成蛋白質(zhì)的路徑

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科