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正文:

怎樣做懸浮性細(xì)胞的免疫螢光染色?顯微鏡百科！

請(qǐng)問(wèn)大家一個(gè)問(wèn)題.
假若養(yǎng)懸浮性的細(xì)胞 (例如自然殺手細(xì)胞,NK cell)
如何把這樣的懸浮性細(xì)胞固定在cover slip上之后,然后做IF(免疫染色)

奇怪的是:

1. 細(xì)胞都會(huì)ㄧ團(tuán),然后在顯微鏡下看都沒(méi)有焦距
2. 背景有點(diǎn)髒 (有點(diǎn)紅或有點(diǎn)綠)
3. 細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)物都看不到 (我們是在看Perforin)

不曉得根據(jù)以上的步驟,可能會(huì)是什么原因呢?

以及,不知道大家都怎么做懸浮性細(xì)胞的IF呢?(都是:貼附-固定-染色嗎?)

北京上光儀器：
我們有試過(guò)將NK cell貼在poly-lysine coated cover slip (BD)

直接把NK cell加在poly-lysine coated cover slip上,5小時(shí)

然后細(xì)胞的確會(huì)黏上去 (但會(huì)ㄧ團(tuán)一團(tuán))

之后照以下步驟去做IF,如下:

1. 用prewarmed PBS洗2次
2. 以3.7% Formalin固定15min
3. 以PBS (含0.2% Triton X-100)打洞,5min x 3次
4. 以blocking buffer (PBS+5% BSA)室溫blocking 1hr
5. 1抗 (1:50 diluted in blocking buffer),室溫1-2hr (或 4度C overnight)
6. 以PBS洗,5min x 3次
7. 2抗 (Cy3-labeled anti-rabbit IgG, 1:100稀釋),室溫45min-1hr
8. 以PBS洗,5min x 3次
9. 然后以正立螢光顯微鏡觀察

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科