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植物病毒檢測技術介紹,植物病毒血清與分子檢測技術,金相顯微鏡專家！

　　為生產(chǎn)符合規(guī)定的健康種苗，須先行親本的病毒檢測，確定無病毒后，才能進行組織培養(yǎng)，并進入大量繁殖的階段，因此，病毒檢測技術實為作物邁向健康種苗產(chǎn)業(yè)之重要關鍵。植物病毒檢測診斷技術包括：病徵診斷法、生物檢定法、病毒內含體診斷技術、電子顯微鏡技術、血清檢定法與核酸檢測技術，其中病徵診斷法與內含體觀察須由經(jīng)驗豐富者判斷，且部分植物病毒病害的病徵與微量元素缺乏引起的病徵相似，易致誤判；生物檢定法雖然成本低廉，但是須有隔離溫（網(wǎng)）室及 7 ~ 10 天觀察期；電子顯微鏡不但造價昂貴且須專人操作，恐怕無法應用于產(chǎn)業(yè)界，目前仍以學術性觀察病毒顆粒之研究為主。

　　鑒于植物病毒顆粒結構主要以外部的鞘蛋白及內部的核酸為主，因此植物病毒檢測技術可分為 2 個主流：一為針對鞘蛋白的抗血清檢定技術，以酵素連結抗體吸附反應（ Enzyme-linked immunosobent assay, 簡稱 ELISA ）為主；另一則針對內部核酸物質的核酸檢測技術，以反轉錄核酸聚合脢連鎖反應（ Reverse transcription- PCR ， 簡稱 RT-PCR ）為主。近年，隨著動植物疫病快速檢測診斷之需求，學者更將分子生物學、酵素動力學、電子學、光學與訊號處理等技術結合成生物晶片 (Biochip) ，應用于植物病毒的檢測。以下針對 ELISA 、 RT-PCR 及生物晶片等植物病毒檢測技術加以介紹：

一 . ELISA

　　此技術係利用抗體與抗原的專一性結合，經(jīng)由標定于抗體上酵素之作用，將檢測結果以顏色變化呈現(xiàn)，輔以儀器讀取其吸光度數(shù)據(jù)，俾憑判斷正負反應。因其抗體抗原結合順序差異或酵素連接抗體與抗原的直接與間接性，又可分為直接法與間接法，目前以間接法應用較廣。此技術不僅具有快速、專一、方便及經(jīng)濟等特性，更適用于大量樣品之病毒檢測，加上結果之再現(xiàn)性與穩(wěn)定性均深獲各界肯定，因此，此技術已被種苗業(yè)界廣泛使用。

二 . RT-PCR

　　核酸檢測法係建立于物種間獨特的核酸序列，然后依此序列設計出該物種人工合成的短片段專一性核酸引子對，再配合核酸聚合酵素連鎖反應 (Polymerase Chain Reaction, 簡稱 PCR) 技術，此技術乃利用一種分離自細菌的耐高溫核酸複製酵素，在適宜的變溫循環(huán)程式下，針對目標病毒的特定區(qū)域核酸進行快速複製，約經(jīng) 2 小時 30 個循環(huán)左右，即可複製出約 2 30 （約 10 億）倍的核酸，再經(jīng)由電泳分析以肉眼判別所增幅的核酸條帶。植物病毒核酸大多屬于 RNA ，故在變溫循環(huán)前，須先以病毒反轉錄酵素（ reverse transcription ）進行 RT-PCR ，將 RNA 反轉錄成 DNA 分子。

　　由于基因體核酸乃各種病毒蛋白前驅物，而 PCR 係針對病毒核酸分子進行檢測，因此理論上比 ELISA 技術更敏感，可更早偵測到病毒的存在。