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微孢子蟲病診斷方法-一級確定診斷抹片標(biāo)本顯微鏡鏡檢！

一級初步診斷：
輕度感染時因食慾及病變均不明顯，又不易致死，故不易察覺、診斷。但若香魚之皮膚、鰭、肌肉、鰓、腹腔內(nèi)各臟器之漿膜及脂肪組織見散發(fā)或密發(fā)之乳白色結(jié)節(jié)樣異物瘤，可從其內(nèi)容物之抹片標(biāo)本檢出橢圓或卵圓形之單一極囊、極核微孢子蟲，大小為5.0-6.1μm×2.0-2.6μm，極絲長約100μm。

二級初步診斷：目前魚類微孢子蟲尚無體外培養(yǎng)的方法。

三級初步診斷：目前尚無可應(yīng)用之方法。

一級確定診斷：
由發(fā)病魚體所產(chǎn)生的外表或臟器內(nèi)之異物瘤，可從其抹片標(biāo)本顯微鏡鏡檢，有些研究者應(yīng)用（kokoskin et al. 1994; Ryan et al. 1993）Chromotrope染色法而加以修改縮短染色時間，增加孢子與背景的對照，如Hot Gram-Chromotrope染色法，可將孢子染成粉紅色。
再則可應(yīng)用穿透式電子顯微鏡觀察孢子形態(tài)，其細胞內(nèi)沒有粒線體、過氧化物酶體、典型扁平囊狀高爾基體，但具有完整的細胞核，是比較原始的真核生物，同時利用微孢子蟲之超顯微結(jié)構(gòu)，依據(jù)超顯微結(jié)構(gòu)（如極絲纏繞的圈數(shù)）可以基本確立微孢子蟲的種類。

二級確定診斷：
目前魚類微孢子蟲尚無血清型分類的依據(jù)；唯可應(yīng)用間接免疫螢先抗體法或酵素免疫吸附法（ELISA）來檢查宿主血清抗體的相對水平。

三級確定診斷：
依據(jù)微孢子蟲之SSU和LSU rRNA基因序列以及它們之間的間隔序列而設(shè)計的特異性PCR引物（primers），可以用來檢測和鑑定微孢子蟲的種類，但研究的對象均偏重于感染人的微孢子蟲，如：E. bieneusi、E. cuniculi、E. hellem、E. intestinalis。至于魚類微孢子蟲；Docker et al.（1997, R）根據(jù)rRNA序列設(shè)計一套引物評價PCR技術(shù)檢測大鱗大麻哈魚感染Loma salmonae的靈敏性和特異性，發(fā)現(xiàn)該技術(shù)能檢測到相當(dāng)于一個孢子的DNA量。Georgiadis et al.（1998）現(xiàn)場評價巢式PCR（Nested-PCR）對檢測感染Nucleospora salmonis之虹鱒的靈敏性和特異性，分別達到99.99%及99.87%。Lee & Yokoyama（2000）比較了幾種檢測方法，發(fā)現(xiàn)原位雜交法（in situ hybridization, ISH）檢測香魚">香魚微孢子蟲（Glugea plecoglossi）感染虹鱒之靈敏度高，可以檢測到前孢子期，唯上述這些方法，均偏于實驗階段，尚未開發(fā)擴展應(yīng)用到臨床檢測等相關(guān)工作。