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作者:yiyi發(fā)布
時間:2012-5-13 0:35:49
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正文:
顯微鏡的總放大倍數(shù)等于物鏡放大率和目鏡放大率的乘積。但顯微鏡性能的優(yōu)劣不只是視其放大倍數(shù)的高低,而更主要的是視其辨析細(xì)微結(jié)構(gòu)的能力,即性能良好的顯微鏡必須使被觀察的物體放大倍數(shù)高,而且清晰。
顯微鏡辨析細(xì)微結(jié)構(gòu)的能力可用分辨率表示,其能夠辨析的細(xì)微結(jié)構(gòu)越小,則分辨率越高。分辨率的高低,首先取決于物鏡的性能,若設(shè)物鏡分辨出的物體兩點間的最短距離為D,則
式中,λ為可見光的波長,平均為0.55μm;NA為物鏡數(shù)值口徑、鏡口率或稱開口率、。數(shù)值口徑NA是物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率n與鏡口角(即入射角a)的半數(shù)正弦的乘積。
由上可見,顯微鏡的分辨率與波長、介質(zhì)折射率和鏡口角(入射角)有關(guān)。λ越大,D值越大,分辨率越低;n和a越大,D值越小,分辨率越高。因此,可以通過縮短光線波長,增大介質(zhì)折射率和加大鏡口角(入射角)來提高分辨率。紫外光顯微鏡和電子顯微鏡就是利用短波光和電子波來提高分辨率的。但普通光學(xué)顯微鏡用的是可見光,波長一定,平均為0.55μm,而鏡口角是指物鏡光軸上的物點發(fā)出的光線與物鏡前透鏡有效直徑的邊緣所張的角度,理論上最大為1800,故sin(a /2)理論最大值為1(實際上鏡口角度最大只能為1400),因此試圖通過縮短波長或提高鏡口角來提高光學(xué)顯微鏡的分辨率是有限度的。只有通過提高介質(zhì)的折射率來提高數(shù)值口徑,從而提高其分辨率。在使用低倍鏡和高倍鏡時,鏡頭與玻片標(biāo)本間的介質(zhì)是空氣,其折射率是1,sin(a/2)=sin700=0.94,故其數(shù)值口徑NA=1x0.94。使用油鏡時,鏡頭與玻片標(biāo)本間的介質(zhì)是香柏油,香柏油的折射率為1.515,則其NA= 1.515 x 0.94,故油鏡的數(shù)值口徑總是大于低倍或高倍鏡的數(shù)值口徑,其數(shù)值口徑最大可達(dá)到1.4,所以油鏡的分辨率比低倍鏡或高倍鏡要高的多。例如,在可見光照射下,用數(shù)值口徑1.25的油鏡(一般油鏡的鏡口角半數(shù)的正弦為0.81),能分辨出物體兩點間的最短距離D=0.55/(2 x 1.25)=0. 22μm而且數(shù)值口徑為0.65的高倍鏡,能分辨出的最短距離D=0.55/(2 x 0.65)=0.42μm 。即兩點間的最小距離如果小于0.4μm,在高倍鏡下即混為一點,不可辨晰,而在油鏡下則清晰可見。
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