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標(biāo)題:顯微鏡下簡(jiǎn)稱(chēng)精液檢查死,活精子!染色的方法

信息分類(lèi):站內(nèi)新聞   作者:yiyi發(fā)布   時(shí)間:2012-6-11 11:22:23 將本頁(yè)加入收藏

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正文:

人工生殖技術(shù):精液檢查死、活精子之染色:

  此法乃利用死、活精子吸收染色劑之差異性為依據(jù)。此試驗(yàn)中,玻片上死亡之精子會(huì)吸收染色劑而呈藍(lán)色,活精子不吸收染色劑而無(wú)色。染色劑之配制法如下:

    A.染色劑 ─ 2 % 水溶性 eosin 溶于 M/8 之磷酸緩沖液中 (pH7.3)

  磷酸緩沖劑:80.4 ml M/8 之 Na2HPO4

        19.6 ml M/8 之 KH2PO4

    B.染色劑 ─ 1 份 Opal blur 加 1 份 M/8 的磷酸緩沖液

    A、B 染色劑等量混合,加熱過(guò)濾后備用。

染色之方法:

滴 1~2 滴染色劑于乾淨(jìng)載玻片上, 再滴入精液混合,上蓋另一片玻片,去除多馀之染色劑,并用布拭淨(jìng)玻片邊緣,再將 2 玻片分開(kāi),置于加熱盤(pán) (65℃) 上使乾燥。
玻片乾燥后,以顯微鏡之高倍 (×1000) 來(lái)計(jì)數(shù)。通常計(jì)算精子 333 只,逢機(jī)取樣,若部分精子僅核有染色,判定為死精子;罹訑(shù)可以公式=活精子數(shù)× 3/10=活精蟲(chóng)數(shù) % 。

五、冷休克:

  活精子在冷震盪前以不同染色劑染色,可測(cè)定活精子所佔(zhàn)的%。其方法如下:少量稀釋過(guò)的精液樣品浸入 0℃ 水浴中 10 分鐘。俟冷休克后計(jì)算活精子的 %。使用原精液時(shí),很多精子會(huì)死,所以可依需要將原精液稀釋?zhuān)?1 ml 做試驗(yàn)即可。稀釋液拌演緩沖 劑及精子抵抗冷休克之保護(hù)劑。冷休克后活精子的 %,在適當(dāng)貯存條件下,可望維持活力 2~5 天。

六、精子的糖分解反應(yīng):

  精子的解糖作用乃其細(xì)胞酵素及其他還原物質(zhì)所致,將葡萄糖還原成酸(乳酸或其他)。許多研究者認(rèn)為精子解糖作用為精子活力之能量來(lái)源,與其存活率無(wú)關(guān)。影響精子解糖速率之因子如溫度、精蟲(chóng)活力、糖濃度、氫離子 濃度、酸度等。測(cè)定精子解糖速率是一定時(shí)間間隔前后,測(cè)葡萄糖含量與乳酸含量之化學(xué)分析。培養(yǎng)液中葡萄糖含量減少,酸度上升之變化,與精蟲(chóng)活力成正比。










出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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