標(biāo)題：腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞實驗原理和步驟！可拍照顯微鏡價格
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2012-6-17 1:25:30
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正文:
初代細(xì)胞之分離－腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞(adrenal medulla)
實驗原理：
1. 腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞(adrenal medulla)，為內(nèi)分泌腺體，在胚胎發(fā)育過程中源自于外胚層之神經(jīng)脊，因此保有許多與交感神經(jīng)節(jié)后神經(jīng)細(xì)胞之特性，為研究此類實驗不錯的材料之一。
2. 嗜鉻細(xì)胞為腎上腺中負(fù)責(zé)分泌兒茶酚氨(catecholamine)之作用，由于鉻鹽會與catecholamine結(jié)合形成黃色化合物，故稱為嗜鉻細(xì)胞。
3. 腎上腺髓質(zhì)亦于其他內(nèi)分泌系統(tǒng)的腺體，在于其不受下視丘及腦下垂體的控制，而是直接接受中樞神經(jīng)傳來的訊息分泌catecholamine，藉由血液循環(huán)作用至目標(biāo)器官，catecholamine可增進肝糖分解、加速心跳、升高血糖、提供生物體對抗或逃離危險之應(yīng)變能力。
4. 嗜鉻細(xì)胞在初代培養(yǎng)中(primary culture)數(shù)天后，其型態(tài)會有所轉(zhuǎn)變，會具有類似神經(jīng)細(xì)胞之生長特性之長椎突出，細(xì)胞內(nèi)液含有神經(jīng)細(xì)胞特有之蛋白質(zhì)。
5. 此外嗜鉻細(xì)胞具有對膜電位敏感之Ca2+與Na+之通道(voltage-sensitive channels)。因此嗜鉻細(xì)胞常被當(dāng)作模型系統(tǒng)，用來研究神經(jīng)衝動的傳導(dǎo)過程及”刺激-分泌”偶合反應(yīng)(stimulus-secretion coupling)之機轉(zhuǎn)。
實驗步驟：
剪去牛腎上腺外的脂肪
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以perfusion buffer從腺體開口來回灌洗
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配置collagenase solution，以酵素原液于37℃水浴槽來回灌洗腎上腺5min，在靜置作用10min
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將髓質(zhì)取下以剪刀剪碎
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將髓質(zhì)置入四倍稀釋的collagenase solution于37℃水浴槽作用30min
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以孔徑400μm的尼龍網(wǎng)過濾混合液，過濾后離心(1200rpm, 5min, 4℃)
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倒除上清液，沉淀物以perfusion buffer重新懸浮，再離心（重複三次）
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去除上清液，搖晃細(xì)胞液，并緩慢低入lock’s buffer或loading buffer至50ml
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再以尼龍網(wǎng)，將凝結(jié)在一起的細(xì)胞過濾掉，之后離心(1000rpm, 5min, 4℃)
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將細(xì)胞以PBS懸浮至適量體積，進行細(xì)胞顯微照相
實驗結(jié)果：
將分離到的腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞(adrenal medulla)以PBS懸浮之后，于顯微鏡下進行照相保存，其結(jié)果記錄成圖一及圖二。其中圖一為沒有用trypan blue染色的結(jié)果，圖二為有用trypan blue的染色結(jié)果。在圖一中細(xì)胞較小的部份為腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞(adrenal medulla)；在圖二中白色亮點的小細(xì)胞亦為腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞。
結(jié)果討論：
在實驗的過程中，以perfusion buffer從腺體開口來回灌洗的步驟主要是要將紅血球洗乾淨(jìng)，以免在分離腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞時會有多馀的紅血球。我們在實驗的過程中，因為時間上的限制，所以紅血球并未完全被清乾淨(jìng)，在細(xì)胞離心的時候可以看到pellet旁邊有一小塊紅色的紅血球pellet。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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