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正文:
一、設(shè)備
1準備室:供器具洗滌、乾燥、培養(yǎng)基配置及殺菌作業(yè)
2.無菌室:供無菌操作之處,應(yīng)噴灑酒精以消毒室內(nèi)空氣。為防止污染空氣,經(jīng)由進出口處進入室內(nèi),應(yīng)有空氣噴射裝置或雙門設(shè)備。
3.培養(yǎng)室:培養(yǎng)室需考慮溫度、光線、濕度及空氣含菌程度。
溫度—以20~25℃范圍內(nèi)為宜,有時尚須另行設(shè)置15℃、20℃、25℃或30℃定溫箱。
濕度—相對濕度保持在70~80%程度為宜(自然濕度狀態(tài))。
光線—以普通日光燈或植物燈照射燒瓶,每日照明16~24小時。植物在燈光長日照射下,可易于吸收營養(yǎng)、促進生長。
二、無菌操作
1.無菌操作臺或無菌箱(膠布罩蓋下的簡易無菌操作)
2.殺菌液
a.70﹪酒精溶液:器具與操作臺的消毒
b.次氯酸鈉溶液(1%~5%):植物體消毒
3.消毒器材
a.高壓蒸汽滅菌器(autoclave sterilizer):以120℃高溫加熱15~20分鐘,一次完成殺菌工作。
b.酒精燈與燃燒器:供刀具與鑷子等殺菌之用
c.細孔過濾器:在高溫下易分解的吉貝素(gibberellin),可用此方法消毒。
三、器具
1.鋁箔紙
2.皿盤
3.手術(shù)刀、鑷子與剪刀
4.組織培養(yǎng)瓶
四、培養(yǎng)基
1.培養(yǎng)基成分
a.水:可利用一般自來水,若系試驗或研究則使用蒸餾水
b.無機鹽類:氮、磷酸、鉀、鎂、硫、鐵及少量硼、錳、鋅、碘、鉬、銅及鈷等。
c.有機化合物
碳水化合物—一般以20~30g/l濃度的蔗糖作為碳素來源。
植物荷爾蒙—生長素(NAA、IAA、2,4-D、IBA)、細胞分裂素(BA、玉米素、激動素)。
維生素類—VitB1、VitB6、菸堿酸可用于癒合組織及細胞培養(yǎng);
生物素、葉酸、VitB12、泛酸鈣可供增殖用。
胺基酸—甘氨酸(glycine)可促進生產(chǎn)的效果。
d.天然物
椰子乳—促進癒合組織及細胞培養(yǎng)時之器官分化效果,通常于培養(yǎng)基中添加10~20%。
香蕉—以黃熟后的150~200g/l香蕉汁,加入培養(yǎng)基中有促進發(fā)育的效果。
馬鈴薯—削去皮與芽煮后用紗布過濾,再將其溶液加入培養(yǎng)基中,有香蕉的效果。
e.活性碳(active carbon)—經(jīng)加溫乾燥的活性碳加入濃度1~10g/l培養(yǎng)基內(nèi),可自培養(yǎng)基中吸取有害物質(zhì)。
2.培養(yǎng)基底材
一般系用洋菜(Agar)
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