標(biāo)題：使用油鏡鏡頭或是相位差顯微鏡觀察外部形態(tài)
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2012-12-19 23:22:33
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正文:
使用油鏡鏡頭或是相位差顯微鏡觀察外部形態(tài)
免疫螢光抗體分析法簡介
免疫螢光抗體分析法(Immunofluorescence, FA)
免疫螢光抗體是利用抗原與抗體具專一性結(jié)合之原理，將欲檢測之微生物注射入動物體內(nèi)，
誘發(fā)動物體內(nèi)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體，另外再將這些單株抗體注射入他種動物體內(nèi)，誘發(fā)能與該單株抗體
結(jié)合之第二劑抗體，經(jīng)純化后在該第二劑抗體接上螢光標(biāo)記物，
這些標(biāo)記物會在紫外光下發(fā)出特定的螢光，因此只要將微生物樣本與
第一劑抗體及附有螢光標(biāo)記的特定抗體混合，再將沒有反應(yīng)的抗體
洗掉，將樣本放在螢光顯微鏡下，沒有螢光結(jié)合的微生物便黯的淡
無光，附有螢光標(biāo)記的微生物則閃閃發(fā)亮，很容易將我們想找的微
生物與其他的微生物區(qū)別出來。這情形就像將游泳池的燈光關(guān)閉，
周圍一片漆黑，只有我們想找的玻璃珠閃閃發(fā)光，很容易就挑選出來。
進(jìn)行免疫螢光抗體分析法時(shí)需要做一組對照組分析的主要目的
是要確定是否所有樣本都能與分析藥劑作用、分析步驟是否正確、
顯微鏡是否能調(diào)整至最佳狀況。進(jìn)行鏡檢時(shí)，
首先使用螢光顯微鏡(Epifluorescence)來觀察正對照組的玻片上是否有發(fā)出螢光蘋果綠
的梨形鞭毛蟲及隱孢子蟲。
假如觀察不到蘋果綠的螢光原蟲體，表
示螢光染色的過程有問題，或是正對照組的制備過程發(fā)生錯誤，要
等到檢查出問題后才可以測試樣本溶液中的原蟲。假如能觀察到發(fā)
出螢光的原蟲，則將玻片由螢光顯微鏡移至100 倍的油鏡鏡頭或是
相位差顯微鏡下。觀察梨形鞭毛蟲囊孢子之內(nèi)部構(gòu)造，包括1 至 4個he，Axonemes 及中體(Median Bodies)，可用目鏡微尺(Occular
Micrometer)來記錄它的大小。觀察負(fù)對照組樣本時(shí)，假如沒有發(fā)現(xiàn)任何原蟲，
而且背景的螢光強(qiáng)度非常弱，可繼續(xù)做水樣原蟲的玻片觀察。
假若發(fā)現(xiàn)螢光染色的原蟲，則可能玻片樣本受污染，須清洗設(shè)備，并檢查所有的試劑及流程。
確定正負(fù)對照組都沒問題后，用螢光顯微鏡觀察整個蓋玻片的范圍。觀察時(shí)，放大倍率需為200倍以上。當(dāng)有橢圓形的螢光出現(xiàn)時(shí)，
將鏡頭轉(zhuǎn)為油鏡鏡頭或是相位差顯微鏡觀察原蟲內(nèi)部構(gòu)造，并記錄下所看到的外型及內(nèi)部胞器，
將空囊體(Empty Cysts)及有胞器的囊體分開記錄及計(jì)數(shù)，
兩者相加即為梨形鞭毛蟲囊孢子用免疫螢光抗體法計(jì)數(shù)所得的總數(shù)。當(dāng)出現(xiàn)卵形或圓球形螢光點(diǎn)時(shí)，
亦將鏡頭轉(zhuǎn)為油鏡鏡頭或是相位差顯微鏡，觀察并記錄胞器的外部形態(tài)及內(nèi)部構(gòu)造，將空囊卵孢子(EmptyOocysts)及有胞器的卵孢子分開記錄，
兩者相加即為隱孢子蟲卵孢子用免疫螢光抗體法計(jì)數(shù)所得的總數(shù)
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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