標題：熒光顯微鏡適合用于觀察枯草桿菌以及細胞培養(yǎng)
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2013-2-6 10:21:00
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正文:
熒光顯微鏡適合用于觀察枯草桿菌以及細胞培養(yǎng)
材料與方法
◆ 菌株與質(zhì)體 (Strains and Plasmids)
本研究使用了三種菌，分別為枯草桿菌 (B.subtilis)、大腸桿菌 (E.coli)以及金
黃色葡萄球菌 (S.aureus)。本實驗使用的枯草桿菌 (B.subtilis)菌株為野生型
PY79 的衍生�？莶輻U菌是革蘭氏陽性菌，在顯微鏡底下觀察呈現(xiàn)桿狀；金黃
色葡萄球菌為 MRSA 菌株，亦為革蘭氏陽性菌，喜歡群聚生長，細胞型態(tài)為
圓球形；大腸桿菌使用的菌株為 K12-MG1655，為革蘭氏陰性菌 。
◆ 細胞培養(yǎng) (General cell cultures)
細胞皆培養(yǎng)于 LB 或 S7 minimal medium，并于指定的溫度。實驗使用 1 mM
螢光顯微鏡 (Fluorescence Microscopy)
進行 Time-lapse microscopy 觀察前，會于 mounting frame (A-7816, Invitrogen)
上鋪上 1％ LB agarose，并區(qū)分為有加 1 mM IPTG 與未加 IPTG。細胞控制約
長到對數(shù)期中期，之后將細胞離心收下并培養(yǎng)在 agarose pad 上。細胞皆培養(yǎng)
在有溫控的培養(yǎng)箱中，實驗則使用 Axio Observer Z1 進行觀察。
◆ 高解析度掃描式電子顯微鏡 (HR-SEM Analysis)
將生長至對數(shù)期的枯草桿菌、大腸桿菌及金黃色葡萄球菌細胞分別或混合培養(yǎng)
在 LB 或 S7 agar，37℃、3 hr 后將 EM grids 覆蓋上細胞，再培養(yǎng) 3 hr。將 EM
grids 輕輕移開并用 0.1M sodium cacodylate buffer (Na(CH3)2AsO2〃3H20; pH 7.2)
洗，之后再用2﹪glutaraldehyde (溶于sodium cacodylate buffer)固定細胞，25℃、
2 hr。接著將細胞培養(yǎng)在 1﹪osmium tetroxide 中，25℃、1 hr 再次固定細胞 (需
避光)。接著用逐漸增加濃度的乙醇使標本脫水。最后，將黏附于 EM grids 上
的細胞用逐漸增加濃度的 freon113 洗。之后將標本 coating 上 gold-palladium (約
8 mm size)后即可使用 FEG HR-SEM 觀察
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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