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正文:
1.用波長合適(依
熒光團而定)且能量足夠(但不引起光漂白)
的激發(fā)光照射標本。
2.觀察熒光時,不要受任何激發(fā)光的污染。
3.光源必須在較窄的光譜范圍內提供較多的激發(fā)能量。
4.選用的濾光片應透射需要的波長,阻斷不需要的波長。
5.物鏡應有較高的透射率,從紫外光到大部分可見光譜
6.選用最大NA的物鏡。一個好的經驗就是,如果選用的物鏡孔徑大2倍,
那么它收集的熒光就多4倍。
7.選用折射率合適的(n=1.51)、非自發(fā)熒光性的、不含PCB的浸油,來消除表面反
射造成的光丟失。
8.
顯微鏡的所有光學部件都不可產生自發(fā)熒光。自發(fā)熒光會增強背景亮度,降低圖像
反差。
9.物鏡鏡頭一定要清潔。
10.選用合適厚度(0. 17mm)的蓋玻片。對于NA>0.7的物鏡來說,蓋玻片厚度在
0.17±0.01mm范圍內有所浮動,依然可呈現高清晰的圖像;當物鏡0. 7>NA>0.3時,
蓋玻片厚度在(0.17±0.03) mm范圍內有所浮動,依然可呈現高清晰的
圖像。
11.浸油層一定要避免氣泡。
12.應關閉視場光闌以提高反差。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科