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正文:
大分子可用電子
顯微鏡直接觀察,樣品制備有許多技術(shù)
電子顯微鏡
大分子可以用電子顯微鏡直接觀察,樣品制備有許多技術(shù),這
里介紹兩種。
觀察核酸的常用方法是展開技術(shù),核酸分子比任何蛋白質(zhì)分子
都要大得多,把核酸分子包埋在一層蛋白質(zhì)膜中,于是它就襄上
一層蛋白質(zhì)分子,如圖所示,蛋白質(zhì)分子起兩個作用:
1、它們使核酸分子伸展開來,原因如下,如果反悔很小體積
的蛋白質(zhì)溶液鋪到離子溶液表面,蛋白質(zhì)分子會展開形成蛋白質(zhì)
單層薄膜,如果核酸分子在蛋白質(zhì)溶液中,它們也隨蛋白質(zhì)膜擴(kuò)
展面伸展開來,核酸分子的伸展使得整個分子清楚可見,不至于
象在沒有伸展情況下看到的那種繚繞和分子間聚集。
2、蛋白質(zhì)在核酸分子上形成一層厚的覆蓋層,這覆蓋層使核
酸分子容易看得見,為了觀察清楚還需要其他一些東西,因為僅
含小原子的分子對電子通常是近乎透明的,因此,為了使核酸分
子可見,覆蓋的蛋白質(zhì)層的分子還得涂上一層重
金屬,這可以將
鉑原子 或沉積在蛋白質(zhì)涂層上,稱為染色,這些重原子是電子
良好吸收物,而背景支持物相對地很少吸收電子,因此,這引起
金屬離子提供了圖像的反差,在對于分子的長度和線狀拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)
感興趣而想觀察很長分子時,投影和染色是很有用的技術(shù)。
如果用剛才所講的蛋白質(zhì)單層技術(shù)還不容易看清楚 ,或是在
對所研究分子的形狀和表面細(xì)節(jié)感興趣時,可以用另一種方法分
子, 這就是負(fù)反差技術(shù)。例如,蛋白質(zhì)分子如果包埋在蛋白質(zhì)
膜中,就無法看到,對此另一種可選擇的方法是涂一層非常薄的
金屬原子,如果這些原子很小,涂層也只有一二個原子厚,那么
這些原子就會沿著粒子的外形排列,這可以用很少量的原子染色
,但是更方便的是用負(fù)反差技術(shù),這種技術(shù)是觀察的蛋白質(zhì)分子
或病毒粒子與磷鎢酸,或鹽溶液混合,兩者都含有強烈吸收電子
的原子,然后將溶液滴涂在支持膜上,含有所研究的大分子或粒
子的微滴便在支持膜上干燥,微滴上有大分子在處有金屬離子的
厚度比其他地主要薄,把樣品放在電子束中時,穿過微滴大分子
區(qū)域的電子就多些,這樣就可得到一些或小的病毒粒子的負(fù)像,
用這各方法觀察到手病毒粒子和蛋白質(zhì)分子的電子顯微鏡照片。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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