標(biāo)題：孵育行酶細(xì)胞化學(xué)反實(shí)驗(yàn)制備-生物圖像顯微鏡
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2016-11-14 19:48:19
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正文:
手工切片(徒手切片)
若實(shí)驗(yàn)室條件不具備，沒(méi)有以上各種儀器，用雙面刀片徒手切
組織也可進(jìn)行酶細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)。手切時(shí)應(yīng)盡可能將組織切薄，一般
能切到0．1nm左右的組織薄片。但是由于孵育液滲透問(wèn)題，一般只
能在30—40微米厚的組織內(nèi)進(jìn)行酶反應(yīng)，而用鈰法時(shí)，由于鈰離子
滲透力弱，反應(yīng)一般只能在20—30pm厚的組織內(nèi)反應(yīng)。所以手切組
織薄片的酶反應(yīng)組織，其中央往往反應(yīng)很微弱，甚至沒(méi)有反應(yīng)，因
此，超薄切片時(shí)只能使用組織表面20—40微米的部分。由于手切組
織太厚，酶反應(yīng)不均一，因此一般只限于酶定位的定性研究，不太
適合于定量研究。孵育
孵育是酶反應(yīng)的重要步驟。組織切片在孵育液中發(fā)生酶反應(yīng)，
爾后產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物。每種酶的孵育液配方，一般文獻(xiàn)介紹有幾個(gè)，
要注意選擇合適的配方。這往往需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)和經(jīng)驗(yàn)來(lái)確定。大多
數(shù)酶反應(yīng)都是與pH有關(guān)的，孵育液必須有良好的緩沖作用，所用的
緩沖系統(tǒng)的能力必須足以對(duì)抗水解步驟中通常會(huì)釋放出來(lái)的酸，孵
育液的pH要精確調(diào)節(jié)。
孵育前為了使組織內(nèi)部建立細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)所需的pH、離子濃度
等合適的環(huán)境。一般需將組織切片置于沒(méi)有底物的孵育液中浸透30
min左右，使組織內(nèi)部建立酶反應(yīng)所需的pH和足夠的捕捉劑濃度。
然后再入孵育液中進(jìn)行酶反應(yīng)。孵育液一般均需新鮮配制，立即使
用，否則會(huì)產(chǎn)生底物的非酶性分解而形成人工產(chǎn)物。孵育液中底物
濃度理論上太高會(huì)抑制酶活性，但實(shí)踐中一般底物濃度是稍過(guò)量的
。孵育液中捕捉劑濃度一般也比較高，但太高也會(huì)抑制酶活性。另
外，配制孵育液時(shí)，一些陰陽(yáng)離子也是很重要的，它們參與酶促反
應(yīng)，并與形成的最終反應(yīng)產(chǎn)物有聯(lián)系，因此，孵育液中必須有合適
的離子種類和濃度參與反應(yīng)。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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