標題：不同的重組DNA分子獲得的轉化子中鑒定技術
信息分類:站內新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2017-2-26 0:39:32
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正文:
不同的重組DNA分子獲得的轉化子中鑒定技術
從不同的重組DNA分子獲得的轉化子中鑒定出含有目的基因的轉化
子即陽性克隆的過程就是篩選。目前發(fā)展起來的成熟篩選方法如下
。
(1)插入失活法：外源DNA片段插入到位于篩選標記基因(Yc生
素基因或盧—半乳糖苷酶基因)的多克隆位點后，會造成標記基因
失活，表現出與轉化子相應的抗生素抗性消失或轉化子顏色改變，
通過這些可以初步鑒定出轉化子是重組子或非重組子。目前常用的
是口一半乳糖苷酶顯色法，即藍白篩選法。
(2)PCR篩選和限制性內切核酸酶酶切法：提取轉化子中的重組
DNA分子作模板，根據目的基因已知的兩端序列設計特異引物，通
過PCR技術篩選陽性克隆。PCR法篩選出的陽性克隆，用限制性內切
核酸酶酶切法進一步鑒定插入片段的大小。
(3)核酸分子雜交法：制備目的基因特異的核酸探針，通過核
酸分子雜交法從眾多的轉化子中篩選目的克隆。目的基因特異的核
酸探針可以是已獲得的部分目的基因片段或是以目的基因表達蛋白
質的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸或其他物種的同源基因。
(4)免疫學篩選法：獲得目的基因表達的蛋白質抗體，就可以
采用免疫學篩選法獲得目的基因克隆。這些抗體即可以是從生物本
身純化出的目的基因表達蛋白質抗體，也可以是從目的基因部分可
讀框(open reading fμme，ORF)片段克隆在表達載體中獲得表達
蛋白質的抗體。
上述方法獲得的陽性克隆最后要進行測序分析，以最終確認目
的基因。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科