標題：轉染細胞理想技術通常取決于細胞類型-聚焦顯微鏡
信息分類:站內新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2017-3-11 22:03:00
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正文:
轉染細胞理想技術通常取決于細胞類型-聚焦顯微鏡
GFP結構轉染細胞
轉染細胞最理想的技術通常取決于細胞類型。通過磷酸鈣共沉
淀或者脂質體的技術，DNA很容易轉染進某些類型的細胞。然而，
對于其他類型的細胞需要電穿孔甚至病毒轉染。本書所描述的是基
于可以買到的脂質體試劑FuGENE6轉染方法。
準備要成像的細胞：將細胞按一定密度種在6或者12孔板的蓋
玻片上或者分室蓋玻片(如Labtek，Mat-tek)上。
如果使用的脂質體試劑要求無血清培養(yǎng)基，則去除含有血清的
生長培養(yǎng)基，換成無
血清的培養(yǎng)基以增加細胞轉染的效率(FuGENE6不需要此步驟)。3
．在一個無菌試管中加入100弘1無血清的生長培養(yǎng)基。4．加3“l(fā)
的FuGENE6試劑，混合。5．加入1pl的o．5p．g／pl的熒光素標記
蛋白表達質粒，混合。6．室溫孵育20min。7．每4cm2面積的細胞
加入100弘1上述混合液。8．孵育直到固定，免疫染色或活細胞成
像。據報道，F(xiàn)uGENE6和許多其他的脂質體試
劑對大部分細胞的生長和蛋白質的表達沒有有害影響，然而，3
～8h后仍然需要換
生長培養(yǎng)基。例如，假設此方法中每4cm2的細胞需要lml生長培
養(yǎng)基；因此，用無
血清培養(yǎng)基制備的100弘1脂質體一DNA復合物會輕微稀釋血清的
濃度。應該注意稀釋
的程度。
哺乳動物細胞時延性共聚焦成像
以下的許多步驟適用于任何配置的顯微鏡，不過本例是關于時
延性共聚焦成像的，這是一個普通的GFP時延性成像試驗，使用的
是激光掃描共聚焦顯微鏡。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科