原子力
顯微鏡術(shù)(AFM)除具有極佳的高解析度與簡單的樣本前處理之外,因也可在液相中取像,已有許多文獻用來觀察微
生物、細胞的微結(jié)構(gòu),
亦有藉之掃描到病毒感染細胞后其表面的出芽模形態(tài),甚至用以探討某些病毒外套膜的表面特徵。本研究首先,以兼嗜性野生型小鼠白血病病毒(MMLV),
分別去感染人類膀胱癌細胞(J82)、人類肺癌細胞(A549)及老鼠纖維母細胞(NIH3T3)等三種宿主細胞,對照性地再以親嗜性MMLV進行宿主與非宿主細胞受感染6 hr后之細胞膜表面的觀察,黏貼于培養(yǎng)皿上的細胞樣本,先以福馬林固定及磷酸鹽緩沖液、去離子水清洗,繼而在空氣中自然乾燥后進行AFM掃描。結(jié)果顯示,當NIH3T3細胞受上述兩種MMLV感染時,均在其表面上發(fā)現(xiàn)許多可能是病毒融合或細胞胞飲作用所造成的孔洞。這在J82及A549細胞受兼嗜性 MMLV感染時亦被發(fā)現(xiàn),然若是受親嗜性MMLV感染的話,則無此類似的現(xiàn)象。其次,我們也將上述的親嗜性MMLV與其經(jīng)外套膜蛋白上修飾Arg- Gly-Asp(RGD)的MMLV,分別探討其對倉鼠口腔癌細胞(HCDB-1)、人類微血管表皮細胞(HMEC-1)兩種非宿主細胞,以及 NIH3T3宿主細胞感染能力的影響。其結(jié)果得知,受RGD修飾之MMLV感染的HCDB-1、HMEC-1,亦會出現(xiàn)和NIH3T3之細胞膜表面上類似的凹陷及孔洞現(xiàn)象,顯示經(jīng)修飾后的病毒可能已轉(zhuǎn)變成可對非宿主細胞具感染作用。最后,為要建立液相中病毒感染細胞的過程的觀察可能性,我們也嘗試了在液相中活體細胞表面的掃描技術(shù)探討,并藉儀器上的力調(diào)變顯微鏡術(shù)紀錄與力/位移曲線,量測整個細胞表面軟硬的分佈。經(jīng)分析細胞表面各點的力學特性,由楊氏係數(shù)求取得知,細胞核中心部位為其周圍區(qū)域的0.05倍。
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