黃麴毒素之檢定方法過程詳細解說！

(1)黃麴毒素的化學(xué)檢定

1.黃麴毒素的抽出物：

根據(jù)Knake and Rao的快速定性方法(Knake and Rao, 1972)將100gm玉米樣品加300ml溶劑(甲醇：水＝7：3)，以均質(zhì)機經(jīng)3,000rpm旋轉(zhuǎn)3分鐘，過濾后取濾液150ml加30ml甲苯，在分液漏斗中振盪30秒后，加200ml蒸餾水使乳化，分離上層甲苯抽出物。次添加10gm無水硫酸鈉(Anhydrous Sodium Sulfate)及5gm綠色鹼性碳酸銅(Green Basic Cupric Carbonate)去除玉米中色素，過濾蒸發(fā)至乾涸，溶于1ml甲醇而得黃麴毒素的粗抽出物。

2.黃麴毒素之定性：

利用薄層色層分析(Thin-Layer Chromatography, TLC)法以Wakogel B-5加適量蒸餾水，舖設(shè)于玻璃板上，風(fēng)乾后在110℃下活化1.5小時，將前抽出物以微量吸管(M- icropipette)及取0.05ml點于TLC板上，以TEF溶媒系(Toluence：Ethylacetate：90％Fo- rmic Acid＝9：3：1)展開1小時風(fēng)乾，在暗室中以364nm的黑射線(Black-Ray B-100 A)照射，與標(biāo)準(zhǔn)黃麴素對照下檢出。

3.黃麴毒素B1的定量：

經(jīng)TLC法檢定為陽性樣品之黃麴毒素粗抽出物0.2ml點于TLC板，經(jīng)TEF溶媒系展開后，收集在Rf＝0.31±0.02處的藍色螢光點溶于定量的甲醇中，黃麴毒素B1的定量計算乃以Beckman Dus-pectrophotometer在362nm波長下吸光度與已知濃度的黃麴毒素B1比較而得。

(2)未知樣品中黃麴毒素之檢驗法

1.將欲測樣品磨碎。

2.秤取50gm裝入500ml的三角瓶中。

3.加入70％丙酮水溶液250ml，塞上橡皮塞于臂氏振盪器中(或其他振盪裝置)振盪30分鐘。

    4.用白磁漏斗(Buchner Filter)以Whatman # 1號濾紙過濾。

    5.將濾液倒入400ml燒杯中。

    6.加20％醋酸鉛水溶液(Lead Acetate Aqu Solution)及60ml蒸餾水。

    7.水浴鍋中蒸發(fā)至約剩150ml。

    8.加入少許Gelite后再以1號濾紙過濾。

9.濾液倒入500ml之分液漏斗中，加50ml氯彷(Chloroform)萃取之，連續(xù)萃取二次，將下層液注入250ml燒杯中。

    10.蒸發(fā)至約剩5ml，加入一量匙100Mesh之硅酸(Silicic Acid)及少量氯彷。

11.用普通漏斗過濾，再以乙醚(Ether)洗滌濾渣三次(每次約50ml)，棄乙醚液。

12.留在濾紙上之濾渣再以5％的甲醇吲漭曋輔G(5％Methanol in Chloroform Sol-ution)洗滌二次(每次約50ml)將洗液裝在燒杯中，蒸發(fā)至乾涸。

13.殘渣以1ml之氯彷溶解后，用1μl的滴管點在硅膠(Silica gel Gtype 60)平板上，同時點上不同濃度之毒素標(biāo)準(zhǔn)液，置于展劑(苯：甲醇：醋酸＝90：5：5)中展開。

14.俟乾燥后置于365nm波長之紫外燈下觀察之。

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