標題：在同一樣品中使用多種熒光染料實驗顯微鏡
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2016-7-17 4:17:58
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正文:
為了在同一樣品中使用多種熒光染料;必須仔細確定每一
抗原只能被一種標記試劑識別。最安全的方法就是使用被不同
熒光染料標記的第一抗體。染色可以同時進行，但是必須包括
進行單獨染色的對照樣品以用于監(jiān)測交叉反應。開始最常遇見
的是第一抗體沒有被標記;而只能通過間接法監(jiān)側。在這種悄
況下，抗體必須來源于不同的種、綱或亞綱，然后用被標記的
第二抗體專一性的識別每一種第一抗體。通常要檢測試劑的專
一性，因為針對于某一種、綱或亞綱的抗體可能與大量的其他
種、綱或亞綱的抗體發(fā)生相互反應，除非它們被專一地吸附
(多家廠商提供的、來源于其他物種并以固定化的血清蛋白預
吸附的第二抗體)。因此要盡可能使用來源于同一物種的第二
杭體。例如，當使用一種兔多克隆抗體和一種小鼠的單克隆抗
體時，就應當使用產(chǎn)于山羊的血清為阻斷劑。另外一項重要的
對照實驗是監(jiān)測檢測試劑的種間交又反應，.即進行每一種第一
抗體與專一性識別區(qū)域的第一抗體的第二抗體之間的每一免疫
染色實驗。
為了減少交又反應，多重染色也可以在固定步驟間連續(xù)進
行。在涉及兩種抗體情況時，例如常常面臨來自同一類型的兩
種小鼠單克隆抗體，則最好有一種直接標記。為了避免可能出
現(xiàn)的第二標記抗體與該標記的第一抗體的結合，在連續(xù)染色
時，最后用標記第一抗體染色的方法也是非�？扇〉摹�
總之，為了進行多重標記免疫染色實驗，必須注意下而二
個垂要標準:
①所選擇的熒光染料必須具有較好的光講分辨特性。
②為了避免相互識別，第二抗體必須來源于同一種宿主動
物。它們也不能識別所用的其他第一抗體和在檢測中存在的其
他任何免疫球蛋白.而且他們也不能直接與樣品反應。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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