標(biāo)題：酶或麥芽糖結(jié)合層析生物實驗圖像顯微鏡
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2016-10-2 22:22:33
將本頁加入收藏
下一篇：植物及微生物酶最適pH多在4．5～6．5左右
上一篇：根據(jù)它們的分子大小排阻或凝膠過濾層析
點擊查看產(chǎn)品參數(shù)和報價--丨--
---
---
---
正文:
親和層析
一些蛋白質(zhì)的一個重要的特點是不通過共價作用就可以與配體緊密
連接。這個性質(zhì)被用于純化，基本原理是配體通過共價作用連接到基質(zhì)
上。當(dāng)流動相流過柱子時，與配體有強親和力的蛋白質(zhì)結(jié)合到配體上，
它們流過柱子的速度減慢，與配體無親和力的蛋白質(zhì)直接流過柱子。這
種方法為純化提供了一種獨特的選擇途徑。親和層析有一個很大的優(yōu)點
就是利用了蛋白質(zhì)的生物化學(xué)性質(zhì)而不是蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)。
親和層析依賴于蛋白質(zhì)與不移動的配體之間的相互作用。結(jié)合必需
足夠特異以區(qū)分不同的蛋白質(zhì)，但如果結(jié)合非常緊密(大的親和力)，從
柱子上洗脫蛋白質(zhì)也是一個問題。主要的洗脫方法是競爭蛋白質(zhì)的結(jié)合
位點。因此，常用的洗脫方法是加入外來的或自由的配體與共價連接的
配體競爭與蛋白質(zhì)的結(jié)合位點。第二種方法是改變?nèi)芤涵h(huán)境到足夠阻礙
蛋白質(zhì)與配體之間的結(jié)合。在這些條件下，蛋白質(zhì)不再表現(xiàn)與配體間很
強的親和力從而被洗脫。后一個方法中不能用可以使蛋白質(zhì)變性的溶液
環(huán)境，一般只是適當(dāng)?shù)馗淖內(nèi)芤旱膒H與離子強度。酶很適合于這種層析
方法，協(xié)同因子如NAD、NADP和ADP無疑被用作親和層析中的配體。
親和層析的一個限制因素是必須有辦法把配體共價連接到基質(zhì)上。
這一共價修飾又不能破壞它與蛋白質(zhì)之間的親和力，還必須在層析過程
中使用中性的溫度、pH以及溶液環(huán)境下使之能夠穩(wěn)定存在而不被破壞。
最近，有大量的基于親和層析的分離方法出現(xiàn)，因為表達系統(tǒng)的發(fā)展可
以產(chǎn)生帶組氨酸標(biāo)簽的蛋白質(zhì)以及融合到其他蛋白質(zhì)如谷胱苷肽S轉(zhuǎn)移
酶或麥芽糖結(jié)合蛋白的蛋白質(zhì)。組氨酸標(biāo)簽可以加到蛋白質(zhì)N端或C端并
結(jié)合到金屬螯合的含有亞乙酸配體的柱子上。同樣，谷胱苷肽S轉(zhuǎn)移酶
可以結(jié)合到谷胱苷肽配體上，谷胱苷肽配體可以共價結(jié)合到瓊脂糖凝膠
上。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
特別聲明：本文出自北京上光儀器有限公司-未經(jīng)允許請勿轉(zhuǎn)載，本文地址：http://www.bjsgyq.com/news/8948.html
北京地區(qū)金相顯微鏡專業(yè)的供應(yīng)商
北京地區(qū)金相顯微鏡專業(yè)的供應(yīng)商