標(biāo)題：使用低黏稠度梯度介質(zhì)與蔗糖溶液相比特點(diǎn)
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2016-11-12 23:57:24
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正文:
使用低黏稠度梯度介質(zhì)與蔗糖溶液相比特點(diǎn)
器材
除了微粒體的沉淀以外，所有的差速離心都能在冷凍高速離心
機(jī)中進(jìn)行。為了將小顆粒對(duì)沉淀物的污染降到最小限度(見(jiàn)上文)，
與吊桶式轉(zhuǎn)子相比更推薦使用固定角轉(zhuǎn)子(管體積相同)，因?yàn)樗鼈?/div>
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
在凹液面和管底之間的沉降路徑更小，離心力的差距也小。很明顯
，轉(zhuǎn)子的角度越小(對(duì)于垂直方向來(lái)說(shuō))，分離的效率越高，但是小
角度的另一個(gè)影響——沉淀趨于堆積得較松散，界限不明確，這是
一個(gè)缺點(diǎn)。實(shí)際上，大約30°的轉(zhuǎn)子是個(gè)折中的辦法。除了沉淀細(xì)
胞核(第一步)這個(gè)唯一的特例之外，都推薦使用固定角轉(zhuǎn)子；傾向
于在這一步中使用吊桶式轉(zhuǎn)子只是由于它常規(guī)地用于低速離心機(jī)(
低速離心機(jī)主要匹配于這種轉(zhuǎn)子)。此外，核與下一個(gè)最大的細(xì)胞
器(線粒體)之間的沉降率差距如此之大，以至于轉(zhuǎn)子的種類不再那
么重要了。
密度梯度離心
現(xiàn)在廣泛認(rèn)為，特別是對(duì)于一些可以在相對(duì)較低的離心力(100
0g～15000g)下沉淀的較大細(xì)胞器(細(xì)胞核、線粒體、溶酶體和過(guò)氧
化物酶體)來(lái)說(shuō)，在吊桶式轉(zhuǎn)子長(zhǎng)沉降路徑下以100000g以上的轉(zhuǎn)速
，使用黏稠、高滲的蔗糖梯度溶液，既不方便也對(duì)細(xì)胞器有潛在的
傷害。因此，顯著地趨向于使用低黏稠度梯度介質(zhì)如Nycodenz@或
碘克沙醇，這些梯度溶液與蔗糖溶液(或甚至等滲的溶液)相比
有更低的摩爾滲透壓濃度。盡管傳統(tǒng)的吊桶式轉(zhuǎn)子仍然被廣泛地用
于密度梯度離心，垂直或接近垂直轉(zhuǎn)子的短沉降路徑不僅減少了離
心時(shí)間，也將梯度溶液中強(qiáng)加于顆粒之上相當(dāng)大的流體靜壓的影響
降到了最小。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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